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适体生物传感器的制备及检测原理
发布时间：2014-07-17
丝网印刷生物传感器包括工作电极、对电极、Ag/AgCl参比电极，传感器制备如下：工作电极首先用超纯水清洗，干燥后将10μL的Nafion滴在工作电极表面，干燥后再将10μL1mmol/L的Thi（pH6.5）滴在Nafion修饰的工作电极表面，于室温下放置1h；然后将Nafion-Thi修饰的工作电极浸入20mL的纳米金溶液中在室温震荡的条件下放置2h。预处理的电极用超纯水清洗，10μL100nM的捕获探针溶液被滴在Nafion-Thi-GNPs修饰的工作电极表面，37℃放置1h后用1mmol/L的MCH钝化1h，再用超纯水清洗以除去未结合的寡核苷酸。后将Nafion-Thi-GNPs修饰的工作电极被浸入100nM的HRP标记的适体溶液中，在37℃下杂交1h，清洗完成后，生物传感器制备完成。
基于适体探针和酶的放大作用来检测艰难梭菌TOA的电生物传感器的原理如下。首先，巯基化的捕获探针被共价结合到纳米金上，通过和HRP标记的适体探针杂交，形成半-双链DNA结构。在没有TOA存在的情况下，HRP被固定在电极表面，导致氧化峰电流减少而还原峰电流大幅增加，这表明强烈的HRP催化H2O2作用的过程。当加入TOA，适体更容易和TOA形成毒素/适体复合物而不是适体/DNA的半-双链DNA结构，这会导致HRP标记的探针从电极上脱落，引起还原峰电流的降低。减少的还原峰电流与TOA的浓度呈线性关系，因此可用来定量检测TOA浓度。
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