氨基酸分析的柱前衍生技术

发布时间：2014-11-06

　　1958年sPackman等首先使用了离子交换色谱(IEC)与柱后苟三酮衍生相结合的技术分析蛋白质水解氨基酸,建立了经典的氨基酸自动分析技术。40多年来,氨基酸分析技术及分析仪器发展迅速,日臻完善。分析时间不断缩短,灵敏度不断提高,自动化程度越来越完美。特别是柱前衍生技术与反相高效液相色谱(RP一HPLC)相结合的氨基酸分析技术的出现,形成了具有广泛适应性的现代氨基酸分析技术。
　　氨基酸分析的柱前衍生技术
　　大多数的氨基酸无紫外吸收也无荧光发射特性。为提高分析检测的灵敏度和分离选择特性,常常需要将氨基酸衍生。氨基酸的衍生方式有柱前衍生和柱后衍生两种。柱后衍生与IEC法相结合,通常的衍生试剂为苟三酮和邻苯二甲醛。柱后衍生的缺点在于分析柱易被样品组分污染、分析时间长且灵敏度较低、需要专用仪器且仪器较复杂、试剂必须变为中性才能检测等。从色谱分析的角度上讲,柱后衍生与IEC法相结合分析氨基酸时没有充分发挥高效液相色谱法的优势。而柱前衍生技术与RP一HPLC相结合分析氨基酸正弥补了它的不足。RP一HPLC分析技术快速、灵敏,而且仪器的适用性更广(不止局限于氨基酸的测定),被认为是经典氨基酸分析技术的一种替代技术。
　　目前已经报道的用于氨基酸柱前衍生的衍生试剂很多,主要有:邻苯二甲醛、氯甲酸药甲醋(FMOC一Cl)、异硫氰酸苯醋(PITC)、丹酞氯(Dansyl一Cl)、二甲胺偶氮苯磺酞氯(Dabsyl一Cl)和6一氨基喳琳一N一经基唬拍酞亚胺基氨基甲酸醋(AQC)等,下面依次介绍它们与RP一HPLC相结合分析氨基酸的原理及特点。

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