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氨基酸分析仪分析蛋白水解液
发布时间：2014-12-09
就目前发表的文献及近年来我国情况来看,氨基酸分析80写以上是蛋白氨基酸的分析。不管用何种高级快速的仪器,诸如专门的离子交换色谱(IEc)、高效液相色谱(HPLC)或气相色谱(GLC)等,都必须先将蛋白质水解。且正如Williams〔的所指出的,氨基酸分析的主要误差来源在于采样与前处理。因此,30年来人们对样品前处理特别是蛋白样品的水解方法进行了大量研究。
七十年代Hill和Davies等在比较酸解、碱解、酶解以及不同的酸解介质和条件后得出结论:6mol/LHCI110C水解22~24h为适宜。但实际的操作方法与参数选择却很不相同。
七十年代末至八十年代中,由于仪器的改进与发展,水解方法的研究又出现了一个新高潮,其中有影响也具代表性的就是丹麦Mason、Beoh一Anderson和Rudem。的系列研究，他们对酸样比、水解方式、水解温度与时间、回收率、准确度及精密度、过甲酸氧化法测含硫氨基酸的条件以及同时测定其它氨基酸的可能性等进行了系统地研究,经欧共体29个实验室的联合试验验证,再加上后来Sarwar等人,的研究,给范围内蛋白水解条件及操作参数的确定打下了坚实基础。1989年联合国粮食与农业组织(FAO)和卫生组织(WHO)植物蛋白质量评价专家联席会。回顾了上述发展并提出了如下建议:
(1)食品等蛋白样品的全氨基酸分析应制备三种水解液,即用未氧化蛋白酸解液测定除色、胧和蛋氨酸以外的所有其它氨基酸;用氧化蛋白酸解液测定除色、酪、苯丙和组氨酸以外的所有其它氨基酸且所得数据值可与上述结果相平均;用未氧化蛋白碱解液测定色氨酸。为保证样品的代表性,水解时均需称取足够的样品。
(2)未氧化及氧化蛋白的酸水解可按Pellett、Mason、AOAC(AssoeiationofOffi-calAnalytiealChemists)所述的方法进行。尽管酸样比可在很大范围内(约40倍)变动,但对每克干物质样品,应至少用100ml6mol/LHCI。未氧化蛋白水解时要严格去氧,但不同的脱氧方式,真空和(或)充N:封管水解及通N。回流水解具有相同的效果。酸解温度与时间以110士0.SC22h佳,但在精密分析中应做几个水解时间的分析并用外推法求出苏、丝、异亮和撷氨酸的大值,也可用适当的校正系数对它们的回收率进行较正。也可取得相同的结果,但上述四种氨基酸的校正系数会有变异。酸解后所得的水解液好用中和法而不用蒸干法去酸,必要时可将水解液蒸发至一很小的体积lmD然后再中和。
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